Puskesmas Tirto I berada dalam wilayah Kecamatan Tirto, Kabupaten Pekalongan, Propinsi Jawa Tengah. Luas wilayah kerja UPTD Puskesmas Tirto I adalah 17,39 km² terdiri dari Urban 14.70 km² dan Rural 2,69 km², dengan jumlah desa sebanyak 12 desa binaan yaitu :
- Desa Wuled
- Desa Ngalian
- Desa Pandanarum
- Desa Karanganyar
- Desa Silirejo
- Desa Pucung
- Desa Sidorejo
- Desa Curug
- Desa Samborejo
- Desa Tanjung
- Desa Pacar
- Desa Dadirejo
UPTD Puskesmas Tirto I mempunyai batas-batas wilayah sebagai berikut :
- sebelah timur berbatasan dengan wilayah Kota Pekalongan
- sebelah Barat berbatasan dengan wilayah Kecamatan Wiradesa
- sebelah Selatan berbatasan dengan wilayah Kecamatan Kedungwuni
- sebelah utara berbatasan dengan wilayah UPTD Puskesmas Tirto II
Wilayah kerja UPTD Puskesmas Tirto I merupakan daerah dataran rendah yang merupakan daerah industri kecil dan menengah dan termasuk dalam katagori puskesmas perkotaan.